Alergijski dijagnostički testovi

Alergijski dijagnostički testovi

Metode dijagnostike alergija. Provode se nakon što je kroz temeljito uzimanje povijesti bolesti identificiran niz sumnjivih alergena. Uzorci se izvode izvan faze pogoršanja bolesti i ne prije 2-3 tjedna kasnije. nakon akutne alergijske reakcije, jer za to se vrijeme smanjuje osjetljivost tijela na alergen.

Razlikovanje kože i provokativnih A. d. P. Kožni testovi temelje se na utvrđivanju specifične senzibilizacije tijela unošenjem alergena kroz kožu. Istodobno se procjenjuju veličina i priroda razvojne upalne reakcije. Razlikovati kvalitativne i kvantitativne kožne testove. Korištenjem kvalitetnih kožnih testova utvrđuje se prisutnost ili odsutnost senzibilizacije za ovaj alergen. Ti se testovi koriste u dijagnozi alergijskih, kao i nekih zarazno-alergijskih (tuberkuloza, bruceloza, itd.) I parazitskih (helminthiasis) bolesti. Kvantitativni kožni testovi daju ideju o stupnju senzibilizacije tijela. Uz njihovu pomoć određuje se minimalna koncentracija određenog alergena pri kojoj on uzrokuje vidljivu alergijsku reakciju u senzibiliziranom organizmu. Ova metoda naziva se titracija alergije. Pomoću nje postavlja se doza alergena pomoću kojeg je moguće uvođenjem alergena u tijelo započeti specifičnu hiposenzibilizaciju (smanjenje razine senzibilizacije).

Kožni testovi mogu biti izravni ili neizravni, ovisno o korištenoj tehnici. U izravnim kožnim testovima alergen se ubrizgava intradermalno ili oštećivanjem epiderme bockanjem ili grebanjem. Pomoću izravnih testova kože kapanjem i primjenom, alergen (obično lijek ili tvar) nanosi se na netaknutu kožu u obliku kapi ili aplikacije. Kožni odgovor smatra se pozitivnim kada se jave hiperemija, infiltracija ili mjehurići. Može se dogoditi u roku od 20 minuta (trenutna reakcija), nakon 6-12 sati (prijelazna reakcija), nakon 24-48 sati (odgođena reakcija). Vrsta reakcije na koži ovisi o prirodi imunološkog mehanizma alergijske reakcije (vidi Alergija). Među izravnim kožnim testovima različitih vrsta, najosjetljiviji je intradermalni, nakon čega slijedi skarifikacija, injekcija, primjena, kapanje.

Neizravni kožni testovi uključuju reakciju Prausnitz-Küstner, u kojoj se pacijentov serum krvi ubrizgava intradermalno u zdravu osobu, a nakon učvršćivanja protutijela na koži primatelja (nakon 24 sata), alergen se ubrizgava na isto mjesto. Razvojem lokalne kožne reakcije procjenjuje se prisutnost reaginovih antitijela u testnom serumu. Ova reakcija ne isključuje mogućnost prijenosa patogena s krvnim serumom u prisutnosti latentne infekcije kod darivatelja, stoga je njegova uporaba ograničena. Najviše je uputno reaginova antitijela otkriti pomoću različitih imunoloških reakcija - enzimski imunološki test itd. (Vidi Imunološke metode istraživanja). Izbor vrste kožnog testa ovisi o bolesti, očekivanom stupnju osjetljivosti, prirodi alergena, a također i o reaktivnosti kože. Uzimanje određenih lijekova (antihistaminici, sedativi) dramatično smanjuje reaktivnost kože, stoga je prije alergijskog pregleda potrebno suzdržati se od uzimanja ovih lijekova 5-7 dana.

U dijagnozi alergijskih bolesti ne može se u potpunosti osloniti na kožne testove i precijeniti njihove rezultate. Testiranje kože i procjenu njihovih rezultata provodi samo posebno obučeno medicinsko osoblje.

Ako postoji nesklad između podataka alergijske povijesti i rezultata kožnih testova tijekom razdoblja remisije, prikazuju se provokativni testovi. Ti se testovi temelje na reprodukciji alergijskih reakcija uvođenjem alergena u organ ili tkivo, čiji je poraz vodeći na slici bolesti. Razlikovati provokativne testove konjunktive, nosa i udisanja. Provokativni test konjunktive provodi se ukapavanjem alergena u donju konjunktivnu vrećicu. Reakcija se smatra pozitivnom kada se pojave hiperemija konjunktive, lakrimacija i svrbež kapaka. Provodi se nazalni test za alergijski rinitis i peludnu groznicu: alergen se ukapava u jednu polovicu nosa, a kontrolna tekućina u drugu. Reakcija se smatra pozitivnom kada postoje poteškoće u nosnom disanju i svrbež na strani ukapavanja alergena. Inhalacijski provokativni test koristi se za etiološku dijagnozu bronhijalne astme: uz pomoć aerosolnog raspršivača, pacijent udiše otopinu alergena kroz usta. Reakcija se smatra pozitivnom ako se vitalni kapacitet pluća smanji za više od 15%.

Provokativni testovi također uključuju testove hladnoće i vrućine koji se koriste za hladnu i toplu urtikariju (urtikariju). U nedostatku jasnih znakova bolesti, provodi se provokativni test izloženosti. Temelji se na izravnom kontaktu pacijenta s sumnjom na alergen u okruženju u kojem se pacijent obično nalazi. Suprotno od ovog testa je test eliminacije - izuzeće navodnog alergena iz prehrane, prebacivanje bolesnika koji pati od alergija u kućanstvu na takozvani odjel bez alergena itd. Leukocitopenični i trombocitopenični provokativni testovi koriste se u dijagnozi alergije na hranu (Alergija na hranu) i alergiju na lijekove) (... Ti se testovi temelje na smanjenju broja leukocita i trombocita u krvi nakon primjene testnog alergena pacijentu..

Bibliografija: Klinička imunologija i alergologija, ur. L. Yeager, trans. s njom., t. 1-3, M., 1986.; Pytskiy V.I., Adrianova N.V. i Artomasov A. U alergijskim bolestima, M., 1984.; Moderna praktična alergologija, ur. PAKAO. Ado i A.A. Polnera, M., 1963.

Alergijska metoda za dijagnozu zaraznih bolesti je

Alergijski testovi - biološke reakcije za dijagnozu niza bolesti, temeljeno na povećanoj osjetljivosti tijela uzrokovanoj alergenom.

U mnogim zaraznim bolestima, uslijed aktiviranja staničnog imuniteta, razvija se povećana osjetljivost tijela na patogene i njihove metaboličke produkte. Na tome se temelje alergijski testovi koji se koriste za dijagnosticiranje bakterijskih, virusnih, protozojskih infekcija, mikoza i helminthiasis. Alergijski testovi imaju specifičnost, ali često su pozitivni kod onih koji su bili bolesni i cijepljeni.

Svi alergijski testovi podijeljeni su u dvije skupine - in vivo i in vitro testovi.

Alergijska metoda za dijagnozu zaraznih bolesti

U nizu zaraznih bolesti, tijelo postaje preosjetljivo na bakterije koje uzrokuju alergene. Ova pojava pomaže uspostaviti etiološku dijagnozu. U nekim se slučajevima rano, u prvim danima bolesti, formira specifična bakterijska alergija koja se koristi za ranu dijagnozu tularemije (intradermalni alergijski test s tularinom postaje pozitivan 2. - 3. dana).

U drugim se slučajevima alergijsko restrukturiranje tijela događa kasnije, a identifikacija određene alergije može se koristiti u interesu retrospektivne dijagnoze. Metode hiposenzibilizacije tijela uz pomoć odgovarajućih alergena koriste se za liječenje bolesnika s određenim kroničnim oblicima bolesti. Terapijska primjena bakterijskih alergena opravdana je u slučajevima kada terapija antibioticima i druge metode liječenja ne uspiju i bolest poprimi kronični rekurentni tijek.

Te nosologije trenutno uključuju brojne zarazne bolesti koje daju kronične oblike ne-plućne tuberkuloze (oštećenje mrežnice), bruceloze (rekurentni miokarditis), toksoplazmoze (oštećenja mišićno-koštanog sustava).

Alergijski testovi (kožni i intradermalni) stekli su univerzalno priznanje u dijagnozi bakterijskih infekcija kao što su tularemija, bruceloza (Burneov test), tuberkuloza (Pirquetov kožni test i Mantouxov intradermalni test), toksoplazmoza, gljivične kožne lezije, žlijezde i rikecioze (Q groznica). Najlakše je provesti kožni alergijski test u usporedbi s intradermalnim i drugim načinima davanja alergena.

Tehnika intradermalnog alergijskog testa je sljedeća: kap alergena nanosi se na fleksorsku površinu podlaktice ili na kožu ramena (nakon tretmana sa 70% alkoholom) i kroz nju se vrši lagana skarifikacija (bez pojave krvi!). Pozitivan test (nakon 24 i 48 sati) u prisutnosti senzibilizacije tijela na ubrizgani alergen očituje se upalnom reakcijom različitog intenziteta: crvenilo, oteklina, mjehurići, ponekad s osjećajem lokalnog svrbeža i pečenja.

Ozbiljnost reakcije i njezino trajanje ovise o stanju senzibilizacije tijela i koncentraciji bakterijskog alergena (na primjer, pri dijagnosticiranju tuberkuloze, ne smije biti veća od 1:10 000 (!) Kako bi se izbjegle žarišne reakcije u plućima, nastavljajući s uništenjem (!) Plućnog tkiva).

Dijagnostika virusnih infekcija

Laboratorijska dijagnoza virusnih infekcija temelji se na otkrivanju virusa i antitijela na njega. Materijal za istraživanje su biološke tekućine u tijelu i tkivima, gdje se virus nalazi u najvećim količinama. Ovisno o prirodi i stadiju bolesti, ispituju se krv, likvor, iscjedak iz konjunktive, uretre, vrata maternice, nazofaringealna sluz, izmet, urin i dijelovi tkiva organa dobiveni biopsijom ili iz leša.

Za virusološke studije materijal pacijenta ubrizgava se u razne laboratorijske životinje, u pileće embrije i kulture tkiva; Izbor materijala i metode istraživanja određen je tropizmom virusa svojstvenim različitim virusnim infekcijama i njegovom sposobnošću razmnožavanja in vivo i in vitro. Identifikacija virusa provodi se pomoću specifičnih metoda pomoću seroloških testova.

Posljednjih se godina za dijagnostiku koristi lančana reakcija polimeraze (PCR); opseg indikacija različitih virusa ovom metodom brzo se širi. Trenutno je razvijena virološka dijagnostika hepatitisa A, B, C, D, G, TTV; određivanje virusa herpesa, citomegalovirusa, HIV-a itd. Odredite ne samo njihovu prisutnost u ispitivanom materijalu (krv itd.), već i broj virusnih čestica (tzv. "virusno opterećenje" - stupanj viremije i replikacije virusa), što je važno ne samo za dijagnostike, ali i za dinamičko praćenje tijeka bolesti i za procjenu učinkovitosti antivirusnog liječenja (količina virusa smanjuje se dok ne nestane).

Uz PCR, važnost zadržavaju i neke rutinske laboratorijske metode za dijagnosticiranje virusnih infekcija: izravna mikroskopija brisa nosa za određivanje DNA i RNA virusa; reakcija imunofluorescencije (RIF), neizravne imunofluorescencije (RNIF) u dijagnozi gripe i drugih akutnih respiratornih virusnih infekcija; izolacija čistih kultura virusa gripe kako bi se utvrdio njihov tip.

RSK se široko koristi za određivanje titra antitijela u bolesnika tijekom bolesti; reakcija inhibicije hemaglutinacije (RTGA), koja omogućuje određivanje stupnja specifičnog imunološkog odgovora tijela; koriste se i reakcije neutralizacije, taloženje u agaru i mnoge druge posebne virološke metode.

Značaj seroloških i alergijskih metoda u dijagnozi zaraznih bolesti.

Serološka metoda temelji se na određivanju specifičnih antitijela u krvi na odgovarajuće patogene pomoću različitih reakcija (aglutinacija, pasivna hemaglutinacija itd.). Serološke reakcije koriste se u sljedeće svrhe: 1) poznatim antigenom (diagnostikum), sadržaj antitijela na njega određuje se u serumu, 2) poznatim antitijelom (dijagnostički serum), mikrobni antigen se utvrđuje u materijalu ili se identificira izolirani patogen.

Alergijska metoda temelji se na otkrivanju povećane osjetljivosti makroorganizma na određene uzročnike zaraznih bolesti ili proizvode njihove vitalne aktivnosti. Za alergijske testove koriste se lijekovi koji se nazivaju alergeni..

5. Glavne skupine čimbenika patogenosti bakterija:

1) čimbenici prianjanja,

2) čimbenici invazije,

3) čimbenici koji sprečavaju fagocitozu,

4) čimbenici koji suzbijaju fagocitozu,

5) enzimi "obrane i agresije",

6) mikrobni toksini (endo- i egzotoksini).

6. Koji čimbenici patogenosti sprječavaju fagocitozu, a koji inhibiraju fagocitozu?

Čimbenici koji sprečavaju fagocitozu blokiraju faze 1 i 2 fagocitoze. Ovo je kapsula, komponente stanične stijenke - plazmakoagulaza, peptidoglikan, protein A, protein M, teihoične kiseline itd. Ovi čimbenici ili prikrivaju bakterije (hijaluronska kiselina u kapsuli) ili potiskuju aktivnost fagocita.

Čimbenici koji suzbijaju fagocitozu blokiraju oksidativni prasak, što dovodi do nepotpune fagocitoze. Ovo je mikrokapsula, životni vijek bakterija, V-W antigeni itd..

Čimbenici adhezije i kolonizacije bakterija, njihova priroda i značaj.

Čimbenici adhezije i kolonizacije početni su pokretački mehanizmi bolesti. Uz njihovu pomoć, bakterije prepoznaju receptore na staničnim membranama, jačaju i koloniziraju stanice. Ti čimbenici uključuju komponente stanične stijenke: fimbrije (kratki izdanci), proteini vanjske membrane, lipopolisaharid, peptidoglikan, teihoične kiseline (G +).

8. Koji su čimbenici invazije? Kako ih se može predstaviti?

Čimbenici invazije faktori su kojim bakterije ulaze u stanicu. U G - oni mogu biti predstavljeni proteinima vanjske membrane. Također uključuje, na primjer, enzim hijaluronidazu koji uništava vezivno tkivo.

9. Koje enzime "obrane i agresije" bakterija poznajete? Metode za njihovo otkrivanje u bakterijama.

Enzimi "obrane i agresije" potiču širenje bakterija u tkivima tijela. To uključuje plazmakoagulazu, fibrinolitički enzim, lecitinazu, hijaluronidazu, DNazu itd..

Da bi se otkrio hijaluronidaza, kunić se intradermalno ubrizgava 0,2 ml maskare u fiziološkoj otopini u jedno područje depilirane kože, a u susjedno područje dodaje se 0,2 ml trupa s dodatkom filtrata kulture bujona stafilokoka. Mjesto na mjestu ubrizgavanja maskare s filtratom nakon 24-48 sati nekoliko je puta veće od mjesta na mjestu ubrizgavanja maskare bez filtrata zbog povećane propusnosti tkiva u prisutnosti hijaluronidaze.

Da bi se otkrio fibrinolitički enzim, test kultura se inokulira u Petrijeve zdjelice s agar medijem koji sadrži plazmu. Nakon inkubacije 24-48 sati na 37 stupnjeva, oko kolonija bakterija koje proizvode fibrinolizin formira se zona čišćenja.

Da bi se otkrila koagulaza u plazmi, test kultura se inokulira u 0,2 ml citrirane kunićeve ili humane plazme. U slučaju stvaranja koagulaze u plazmi, zgrušavanje plazme događa se 2-4-6-18 sati nakon inkubacije na 37 stupnjeva. Za kontrolu, plazma ostaje tekuća.

Da bi se identificirala lecitinaza, kultura koja se proučava inokulira se na agar žumanjaka. u prisustvu lecitinaze stvara se zona zamućenja i duginih vjenčića oko kolonija bakterija.

Alergijska metoda za dijagnozu zaraznih bolesti

Alergijski testovi - biološke reakcije za dijagnozu niza bolesti, temeljeno na povećanoj osjetljivosti tijela uzrokovanoj alergenom.

U mnogim zaraznim bolestima, uslijed aktiviranja staničnog imuniteta, razvija se povećana osjetljivost tijela na patogene i njihove metaboličke produkte. Na tome se temelje alergijski testovi koji se koriste za dijagnosticiranje bakterijskih, virusnih, protozojskih infekcija, mikoza i helminthiasis. Alergijski testovi imaju specifičnost, ali često su pozitivni kod onih koji su bili bolesni i cijepljeni.

Svi alergijski testovi podijeljeni su u dvije skupine - in vivo i in vitro testovi.

Alergijski testovi in ​​vitro temelje se na otkrivanju senzibilizacije izvan pacijentovog tijela. Koriste se kada se iz jednog ili drugog razloga ne mogu provesti testovi kože ili u slučajevima kada kožne reakcije daju nejasne rezultate..

Za provođenje alergijskih testova koriste se alergeni - dijagnostički lijekovi namijenjeni otkrivanju specifične senzibilizacije tijela. Infektivni alergeni koji se koriste u dijagnostici zaraznih bolesti su pročišćeni filtri bujonnih kultura, rjeđe suspenzije ubijenih mikroorganizama ili AG izolirani iz njih.

Kožni testovi.Infektivni alergeni ubrizgava se, u pravilu, intradermalno ili kožno, trljanjem na skarificirana područja kože. Intradermalnom metodom 0,1 ml alergena ubrizgava se u srednju trećinu prednje površine podlaktice posebnom tankom iglom. Nakon 28 - 48 sati, rezultati reakcije HRT-a procjenjuju se određivanjem veličine papule na mjestu injekcije.

Neinfektivni alergeni (pelud biljaka, prašina iz kućanstva, prehrambeni proizvodi, lijekovi i kemijski pripravci) ubrizgava se u kožu injekcijom (ubodni test), kožno skarifikacijom i trljanjem ili intradermalnom injekcijom razrijeđene otopine alergena. IHN se koristi kao negativna kontrola, a otopina histamina kao pozitivna kontrola. Rezultati se uzimaju u obzir unutar 20 minuta (GNT) prema veličini papula (ponekad promjera do 20 mm), prisutnosti edema i svrbeža. Intradermalni testovi provode se u slučaju negativnog ili sumnjivog rezultata uboda. U usporedbi s potonjim, doza alergena smanjuje se 100-5000 puta.

Kožni testovi na prisutnost HRT-a široko se koriste za otkrivanje infekcije ljudi mikobakterijom tuberkuloze (Mantouxov test), patogenima bruceloze (Burneov test), gube (Mitsudina reakcija), tularemije, žlijezda, aktinomikoze, dermatomikoze, toksoplazmoze, nekih helmintijaza itd..

Uzorci in vitro. Te su metode istraživanja sigurne za pacijenta, prilično su osjetljive i omogućuju kvantitativnu procjenu razine alergizacije tijela..

Trenutno su razvijeni testovi za određivanje senzibilizacije na temelju reakcija T- i B-limfocita, bazofila tkiva, otkrivanja općenito specifičnih IgE u krvnom serumu itd. To uključuje inhibiciju migracije leukocita i blastnu transformaciju limfocita, specifično stvaranje rozeta, Shelleyjev bazofilni test reakcija degranulacije bazofila tkiva, kao i alergosorbentne metode (određivanje specifičnog IgE u krvnom serumu).

Inhibicija reakcije migracije leukocita (RTML). TML se temelji na suzbijanju migracije monocita i drugih leukocita pod utjecajem medijatora proizvedenih od senzibiliziranih limfocita u prisutnosti određenog alergena.

Reakcija blast transformacije limfocita (RBT). Ova se reakcija temelji na sposobnosti normalnih limfocita periferne krvi da ulaze u mitozu i pretvaraju se u blast forme tijekom svog uzgoja in vitro pod utjecajem specifičnih čimbenika - alergena i nespecifičnih stimulatora mitogeneze - mitogena (fitohemagglutinin i konkanavavalinsainpokonvanalvalizin ostale tvari).

Reakcija specifičnog stvaranja rozeta Rozete su karakteristične tvorbe koje nastaju in vitro kao rezultat prianjanja eritrocita na površinu imunokompetentnih stanica. Stvaranje rozete može se dogoditi spontano, budući da ljudski T-limfociti sadrže receptore za crvene krvne stanice ovaca. Spontano stvaranje rozete u zdravih ljudi iznosi 52 - 53% i služi kao pokazatelj funkcionalnog stanja T-limfocita. Ta se pojava reproducira i ako se koriste eritrociti, na kojima su fiksirani odgovarajući alergeni..

Reakcija degranulacije tkivnih bazofila Metoda se temelji na činjenici da se pod djelovanjem alergena događa degranulacija tkivnih bazofila štakora, prethodno senzibiliziranih citofilnim AT iz seruma krvi pacijenta.

Shelley-jev bazofilni test. Poznato je da se bazofilni granulociti čovjeka ili kunića također degranuliraju u prisutnosti seruma pacijenta i alergena na koji je pacijent osjetljiv.

Određivanje IgE antitijela in vitro. Laboratorijska dijagnostika bolesti na temelju GNT-a temelji se na određivanju alergena specifičnih IgEanti-IgE. Kad se koristi radioaktivna oznaka, metoda se naziva radioalergosorbentnim testom (PACT), ali češće se kao oznaka koristi enzim ili fluorescentna tvar (FAST). Vrijeme analize - 6 - 7 sati. Načelo metode: poznati alergen utvrđen na čvrstoj osnovi inkubira se sa serumom krvi pacijenta; serumski specifični IgE anti-IgE veže se na alergen i tako ostaje fiksiran na podlozi i može specifično komunicirati s dodanim obilježenim anti-IgE.

MedGlav.com

Medicinski imenik bolesti

Dijagnostika alergijskih bolesti. Anamneza, uzorci, testovi, imunološke studije na alergije.

PRINCIPI DIJAGNOSTIČKE ALERGIJE.

Zadaci dijagnosticiranja alergijske bolesti su:

• Utvrđivanje prirode bolesti (alergijske ili nealergijske). To se često može utvrditi na temelju karakterističnih pritužbi pacijenta i kliničke slike bolesti (na primjer, peludna groznica, serumska bolest). Međutim, ponekad se pojave značajne poteškoće (na primjer, s neobičnim reakcijama na uzimanje lijekova, hrane itd.);
• Potrebno je razlikovati je li određena alergijska bolest uistinu alergična ili pseudoalergijska, odnosno potrebno je utvrditi stupanj sudjelovanja imunoloških i neimunih mehanizama u razvoju ove bolesti;
• Važno je otkriti uzrok bolesti. Poznavanje uzroka, zajedno s utvrđivanjem stvarne alergijske prirode procesa, dovodi do daljnjeg odgovarajućeg tijeka liječenja, imenovanja specifične hiposenzibilizacije.

Osobitosti metoda ispitivanja su široka upotreba određenih dijagnostičkih testova in vivo i u laboratoriju.

ALERGOLOŠKA ANAMNEZA.

Pod vodstvom akademika Akademije medicinskih znanosti SSSR-a A.D.Adoa razvijen je dijagram povijesti bolesti, gdje su detaljno formulirana pitanja alergološke povijesti. Glavni zadaci povijesti:

• Utvrditi postoji li nasljedna sklonost alergijskim bolestima;
• Utvrditi odnos između čimbenika okoliša i razvoja bolesti;
• Utvrdite one skupine alergena ili pojedinačne alergene koje bi mogle uzrokovati alergije.

Tijekom ispitivanja otkrivaju koje su alergijske bolesti bile u prošlosti ili su trenutno u obitelji pacijenta, kako pacijent reagira na davanje seruma, cjepiva, lijekova; je li zabilježena sezonalnost bolesti, njezina povezanost s prehladom; gdje i kada dolazi do pogoršanja, kakvi su uvjeti života i rada.

Primjerice, pacijente koji su alergični na kućnu prašinu karakterizira "učinak eliminacije" - poboljšanje stanja pri napuštanju kuće.
Ako ste alergični na neke industrijske alergene, karakterističan je učinak ponedjeljka - pogoršanje na poslu nakon vikenda. Povezanost s prehladom obično se otkriva u bolesnika s infektivno-alergijskim oblikom bronhijalne astme, rinitisom. Za bolesnike s peludnom groznicom karakteristična je izražena sezonalnost bolesti - njezino pogoršanje tijekom cvatnje biljaka čiji je pelud alergen. Nasljedna predispozicija otkriva se u bolesnika s reaginičnim tipom alergijskih reakcija.

Dakle, ispitivanje pacijenta već omogućuje određivanje mogućih alergena i sugeriranje vrste alergijske reakcije. Te se pretpostavke moraju potvrditi posebnim metodama ispitivanja - kožnim, provokativnim i drugim testovima..

TESTOVI KOŽE ZA ALERGIJE.

Kroz kožu se ubrizgava alergen za otkrivanje specifične senzibilizacije tijela i procjenu veličine i prirode rezultirajućeg edema ili upalne reakcije. Kožni testovi (CP) obično se izvode u remisiji..

Razlikovati: kvalitativne i kvantitativne, izravne i pasivne kožne testove.

• Kvalitativni testovi daju odgovor na pitanje postoji li senzibilizacija za ovaj alergen ili ne? Pozitivan test još se ne smatra dokazom da je alergen uzrok bolesti. Uzrok može biti drugi alergen s kojim CP nije stavljen. Senzibilizacija na alergen ne rezultira uvijek razvojem alergijske reakcije. Stoga je kod ljudi koji su praktički zdravi moguće otkriti postojanje senzibilizacije na određene alergene (kućna prašina, streptokok itd.) Bez znakova razvoja alergijske reakcije.
  Alergen se može smatrati uzrokom bolesti ako se pozitivni rezultati uzorka podudaraju s podacima iz povijesti bolesti. U nedostatku takve slučajnosti ili nedovoljnog izražavanja CP, provode se provokativni testovi.
• Kvantitativni testovi daju predodžbu o stupnju senzibilizacije. Postavljeni su za identificiranje individualne osjetljivosti i rješavanje problema s početnim dozama alergena tijekom specifične hiposenzibilizacije..
• Uz Direct KP, alergen se daje pacijentu koji se proučava. Uz pasivnu ili neizravnu CP, pacijentov se serum krvi intradermalno ubrizgava zdravoj osobi, a zatim se alergen ubrizgava na mjesta ubrizgavanja seruma (reakcija Prausnitz-Küstner).

Vrijeme i priroda kožne reakcije nakon izlaganja alergenu ovise o vrsti alergijske reakcije. Kada reaginijski tip (Tip I) reakcija se pojavljuje u prvih 10-20 minuta. To je okrugli ili nepravilni mjehur s pseudopodijom. Boja blistera je ružičasta ili blijeda s okolicom arterijske hiperemije. Ta se reakcija naziva mjehurića, urtikarija ili neposredni tip.
Za alergijske procese imunokompleksni i odgođeni tipovi (III i IV vrsta) kožna reakcija je akutna upala sa svim svojim znakovima - crvenilo, oteklina, vrućica u području upale i bol. Razlika između tipova III i IV leži u vremenu razvoja i intenzitetu upale. Kod tipa III upala je izraženija, pojavljuje se nakon 4-6 sati, a prolazi nakon 12-24 sata. Kod tipa IV, upala svoj maksimum razvija za 24-48 sati. Dakle, pomoću CP moguće je utvrditi vrstu alergijske reakcije na ovaj alergen.

Vrste testova kože (CP).

CP aplikacije (sink: kožni, epikutani, flaster testovi).
Koristi se za alergijske kožne bolesti na područjima kože koja nisu zahvaćena oštećenjima. Alergeni su najčešće razne kemikalije, uključujući i lijekove. Koriste se u čistom obliku ili u otopinama u koncentracijama koje kod zdravih ljudi ne uzrokuju iritaciju kože. Tehnika postavljanja kontrole varira. Obično se komad gaze oko 1 cm 2 navlaži otopinom alergena i nanosi na kožu podlaktice, trbuha ili leđa. Zatim pokrijte celofanom i učvrstite ljepljivom žbukom. Rezultati se ocjenjuju nakon 20 minuta, 5-6 sati i 1-2 dana.

Kontrolne točke za skarifikaciju.
Ovom vrstom CP različiti alergeni nanose se na kožu podlaktice u obliku kapi na udaljenosti od 2-2,5 cm i kroz svaku kap s skarifikatorom ili vrhom igle za svaki alergen oštećuju epidermu kako ne bi oštetili krvne žile. Varijanta ove vrste CP je injekcijski test (ubodni test) - injekcija iglom probija samo epidermu. Scarification CP koristi se u slučajevima kada se sumnja na prisutnost reaginičnog tipa alergijske reakcije (s pollinozom, atopijskim oblikom bronhijalne astme ili rinitisa, Quinckeovim edemom, urtikarijom). Otkrivaju samo reaginičnu vrstu alergije. Procjenjuju se nakon 15-20 minuta..

Intradermalni testovi.
Kod ove vrste CP alergen se ubrizgava intradermalno. Ovi su testovi osjetljiviji od skarifikacije, ali i manje specifični. Pri njihovom insceniranju moguće su komplikacije u obliku organskih i općih alergijskih reakcija. Koriste se za otkrivanje senzibilizacije na alergene bakterijskog i gljivičnog podrijetla, kao i za određivanje stupnja osjetljivosti na alergene neinfektivne prirode. Alergeni himenoptera često ne daju pozitivne testove skarifikacije, stoga se također ubrizgavaju intradermalno, a reakcija se otkriva u obliku sistemskih manifestacija. Test s tim alergenima može se klasificirati kao provokativni test..

Prausnitz - Küstnerova reakcija - pasivna reakcija senzibilizacije kože.
Upotrebljavao se za dijagnosticiranje reaginske vrste alergijskih reakcija, na primjer, na alergije na lijekove, hranu, itd., Kao i za proučavanje svojstava reagina i određivanje njihovog titra. Princip reakcije je intradermalno davanje krvnog seruma od pacijenta zdravom primatelju i naknadno uvođenje test alergena na ta mjesta. U prisutnosti odgovarajućih antitijela u krvnom serumu, primatelj razvija trenutnu kožnu reakciju na mjestima injekcije. Trenutno se ova reakcija rijetko koristi zbog opasnosti od prijenosa latentne infekcije krvnim serumom (virus hepatitisa itd.), Kao i zbog pojave laboratorijskih metoda za određivanje reagina.

Intenzitet CP procjenjuje se ili plusevima (od 0 do četiri plusa), ili promjerom papule ili upalnog fokusa. Uzimajući u obzir mogućnost razvoja ozbiljnih komplikacija do anafilaktičkog šoka u slučaju nepoštivanja tehnike postavljanja CP-a, kao i složenost interpretacije dobivenih rezultata, CP u alergološkim sobama može izvoditi samo posebno obučeno osoblje pod nadzorom alergologa.

TESTOVI ZA PROVOKACIJU ALERGIJA.

Provokativni testovi (PT) metoda su etiološke dijagnoze alergijskih reakcija, koja se temelji na reprodukciji ove reakcije unošenjem alergena u šok organ. Po tipu organa šoka (tj. Organa čija je lezija vodeća na slici bolesti) razlikuju se sljedeće vrste PT.

Konjunktivni PT koristi se za identifikaciju alergena koji uzrokuju razvoj alergijskog konjunktivitisa ili pollioze, koji se javlja sa simptomima konjunktivitisa. Izvodi se oprezno iz straha da ne izazove oštru upalnu reakciju. Alergen se ukapava u donju konjunktivnu vrećicu u koncentraciji koja daje slabo pozitivan CP. Uz pozitivnu reakciju pojavljuju se lakrimacija, hiperemija konjunktive, svrbež kapaka.

Nasalni PT koristi se za alergijski rinitis. Najsigurnije. Alergen u istoj dozi kao za konjunktivni PT ukapava se u polovicu nosa. Uz pozitivnu reakciju pojavljuju se kihanje, svrbež u nosu, rinoreja, otežano disanje kroz ovu polovicu nosa. Rinoskopsko određivanje oticanja sluznice školjaka, suženje nosnog prolaza.

Udisani PT obično se koristi za bronhijalnu astmu. Studija se provodi u fazi remisije u bolničkim uvjetima. Ovo posljednje je zbog činjenice da se teški napad astme može razviti odmah ili kasnije (nakon 4-24 sata), stoga se pacijent mora nadzirati. Prije postavljanja PT-a, karakter prisilne VC (FVC) krivulje bilježi se na spirografu i njegova vrijednost izračunava se u prvoj sekundi - FVC; također izračunati Tiffneauov koeficijent, koji je omjer FVC; na VC kao postotak. U zdravih ljudi iznosi 70-80%. Tada ispitanik prvo udahne inhalatorom kontrolnu otopinu, a ako na nju ne reagira, otopine alergena uzastopno, počevši od minimalne koncentracije do one koja će dati primjetnu reakciju. Spirogrami se snimaju svaki put. Test se smatra pozitivnim kada se FVC smanji! a Tiffneauov omjer za više od 20%. Razvijeni bronhospazam zaustavljaju bronhodilatatori. Istodobnim određivanjem maksimalnog volumetrijskog protoka izdisaja u različitim dijelovima krivulje izdisaja, moguće je izvesti zaključak o mjestu prepreke koja je nastala (mali ili veći dišni putovi). Poglavlje 19 opisuje PT za egzogeni alergijski alveolitis.

Hladni PT koristi se kod hladne urtikarije. Komad leda ili boca s ledom stavlja se na kožu podlaktice na 3 minute. Ako je test pozitivan, mjehurića na koži razvija se 5-6 minuta nakon prestanka djelovanja prehlade, što obično odgovara obliku komada leda ili boce.

Termalni PT koristi se za termičku urtikariju. Boca za vaganje s vrućom vodom (40-42 ° C) stavlja se na kožu podlaktice tijekom 10 minuta. Pozitivnu reakciju karakterizira stvaranje mjehura.

Leukocitopenični PT koristi se za etiološku dijagnozu alergija na hranu, a ponekad i na lijekove. Prvo, u bolesnika s alergijom na hranu, u pozadini eliminacijske dijete i u uvjetima odmora na prazan želudac, broj leukocita u perifernoj krvi određuje se dva puta u roku od sat vremena. Zatim, ako razlika između dviju studija ne prelazi 0,3 x 10 u / l, daju hranu ili lijek. Nakon 30, 60 i 90 minuta broji se broj leukocita. Test se smatra pozitivnim kada je smanjenje leukocita veće od 1 x 10 u / l. U slučaju alergija na lijekove, treba paziti da se ne testira postoji li anafilaktička reakcija u anamnezi. Negativni test ne isključuje senzibilizaciju na testirani alergen.

Trombocitopenični PT također se koristi za etiološku dijagnozu alergija na hranu, a ponekad i na lijekove. Provesti slično kao leukocitopenični PT. Smatra se pozitivnim kada se broj trombocita smanji za 25% ili više.

PT za izloženost koriste se kao indikativni testovi. Istražitelj, koji nema jasne znakove bolesti, smješten je u uvjete u kojima se sumnja na alergene može nalaziti, na primjer, u ljekarni, u radionici, u staji, u mlinu, na mjestima cvjetnica itd. U prisutnosti odgovarajućih alergena u okolišu razvija se pogoršanje bolesti.

Uz pomoć provokativnih testova dobro se otkrivaju atopijske i imunokompleksne vrste alergijskih reakcija, teže je otkriti alergijsku reakciju odgođenog tipa.

LABORATORIJSKE STUDIJE U ALERGIJAMA.

Razne imunološke metode istraživanja od velike su važnosti za prepoznavanje postojeće senzibilizacije. Prednost ovih metoda je njihova potpuna sigurnost za pacijente..
Sve imunološke metode otkrivaju samo stanje senzibilizacije, odnosno ukazuju da je ta osoba već imala kontakt s tim antigenom (alergenom). Ne mogu poslužiti kao pokazatelj ili dokaz da će se na ovaj antigen (alergen) razviti alergijska reakcija, jer su uz senzibilizaciju potrebni i brojni dodatni uvjeti za provođenje alergijske reakcije.

Budući da postoje 4 vrste senzibilizacije, u dijagnostičke svrhe trebalo bi se koristiti nekoliko metoda za procjenu mogućeg sudjelovanja sve četiri vrste senzibilizacije..

Prepoznati Tip Reagin Senzibilizacija (tip I), mogu se koristiti sljedeće reakcije:

• radioalergosorbentni test (RAST), koji određuje IgE antitijela na različite vrste alergena;
• radioimunosorbentni test (RIST), koji omogućuje određivanje koncentracije ukupnog IgE. Uzimajući u obzir da bolesti tipa reagin prate porast ukupnog IgE, povećana koncentracija ovog Ig bit će čimbenik koji djelomično potvrđuje sudjelovanje mehanizma reagina, a u nedostatku bolesti služit će kao faktor rizika za njegov razvoj;
• Schultz-Daleova reakcija je izravna i pasivna. Izravna reakcija obično se koristi u pokusima. Da bi se to učinilo, organ glatkih mišića uklanja se iz osjetljive životinje, stavlja u kadu i bilježe se njegove kontrakcije. Zatim se u kupku dodaje alergen i procjenjuje intenzitet grčenja glatkih mišića. Pasivna reakcija može se koristiti za otkrivanje reagina u serumu bolesnih ljudi. Da bi se to učinilo, komadić ileuma majmuna stavlja se u kadu, a zatim se dodaje serum pacijenta.
  Protutijela su fiksirana na crijeva. Naknadni dodatak alergena u prisutnosti odgovarajućih antitijela uzrokuje kontrakciju crijeva.
• bazofilni testovi - izravni i pasivni;
• test za oslobađanje od histamina;
• test degranulacije mastocita.

Citotoksični tip (II tip) sa senzibilizacijom se može identificirati pomoću:

• različite varijante metode imunofluorescencije;
• Coombsov test za autoimunu hemolitičku anemiju;
• radioimunološka metoda istraživanja;
• Steffenova reakcija.

• razne metode za određivanje imunoloških kompleksa u cirkulaciji u biopsijskom materijalu kompleksa taloženih u tkivima i analizu njihova sastava;
• određivanje reumatoidnog faktora;
• razne metode za otkrivanje taloženja antitijela.

• metode za određivanje limfokina koji nastaju nakon kontakta s alergenom. Najčešće reakcije ove vrste su reakcije inhibicije migracije makrofaga i stvaranja limfotoksina.
  

Metoda imunoblotinga.

Trenutno je najčešće korištena metoda imunoblotinga.
Imunoblot (imunoblot) je visoko specifična i vrlo osjetljiva referentna metoda za otkrivanje protutijela na pojedine antigene (alergene). Imunoblot je visoko informativna i pouzdana metoda. Ova metoda istraživanja nema kontraindikacija..

Dijagnostika alergije Immuno CAP.

Posljednjih godina uvedene su nove tehnologije za precizniju testnu dijagnostiku alergija --- Alergijska dijagnostika Immuno CAP.
Nazvan "Allergochip Immuno CAP".

Za testove ImmunoCAP koriste se umjetni rekombinantni alergeni dobiveni molekularnim kloniranjem. Uz njihovu pomoć postiže se rezultat takve točnosti koji se ne može postići tradicionalnom metodom - ne određuju se samo glavne komponente specifične za određeni alergen, već i one manje. "Allergochip" omogućuje ne samo precizno otkrivanje glavnog alergena, već i tvari koje mogu izazvati unakrsnu alergiju.

Ova metoda omogućuje utvrđivanje blažih oblika alergijske reakcije (dermatitis) i opasnijih (astma).
Određivanje koncentracije IgE omogućuje ne samo dijagnosticiranje ove alergijske reakcije, već i predviđanje daljnjeg mogućeg razvoja alergija.
Još jedna važna prednost testova ImmunoCAP je brzina izvršenja - četiri dana. Ali za sada je ovaj dostupan. ne za sve laboratorije.

1. Metode mikrobiološke dijagnostike zaraznih bolesti: bakteriološka, ​​bakteriološka, ​​biolog, serol, alergija i sam imunološki sustav. Njihove prednosti i nedostaci.

Bakterioskopska (mikroskopska) metoda - skup metoda za otkrivanje i proučavanje morfoloških i tinktorskih svojstava bakterija (mikroba) u laboratorijskoj kulturi, patološkom materijalu ili uzorcima iz vanjske okoline pomoću mikroskopije. Koriste se za utvrđivanje dijagnoze zarazne bolesti ili drugog procesa koji uzrokuju mikrobi, kao i za identificiranje izolirane čiste kulture. Metoda bakterioskopskog pregleda je od posebne važnosti ako mikrob ima morfološke i tinktorske značajke ili posebnu lokalizaciju u tkivima i stanicama tijela. Samo je kod nekih infekcija morfološki pregled dovoljan za dijagnozu..

Za dijagnozu većine infekcija, mikroskopija, kao prva faza mikrobioloških istraživanja, ima samo pomoćnu, približnu vrijednost..

Vrijednost bakterioskopske metode leži u njenoj jednostavnosti, dostupnosti tehnika i brzini dobivanja rezultata (30-60 minuta ili manje). Međutim, njegova specifičnost zbog sličnosti morfologije različitih vrsta je mala, a osjetljivost je ograničena - razlučivost metode je u prosjeku 100 000 stanica po ml.

Mikroskopske metode sastoje se u pripremi mikroskopskih pripravaka za mikroskopiju (nativne ili obojene jednostavnim i složenim metodama) od ispitivanog materijala i njihovoj mikroskopiranju pomoću različitih vrsta mikroskopskih tehnika (svjetlosno, tamno polje, fazno kontrastno, luminiscentno, elektroničko). U većini slučajeva rezultati mikroskopskih studija su indikativni. Ipak, mikroskopijom materijala mogu se utvrditi neki morfološki znakovi patogena (prisutnost jezgri, bičevi, unutarstanični uključivi, itd.), Kao i utvrditi prisutnost ili odsutnost mikroorganizama u poslanim uzorcima.

BAKTERIOLOŠKE METODE

Klasična bakteriološka (virološka, ​​mikološka) istraživanja (koja se nazivaju "zlatnim standardom" mikrobiološke dijagnoze). Njegova je svrha izolirati i identificirati patogen.

Algoritam bakteriološkog (virološkog, mikološkog) istraživanja sastoji se od sljedećih glavnih faza:

1) primarna mikroskopija (neobavezna);

2) primarna sjetva radi izolacije čiste kulture;

3) nakupljanje čiste kulture;

4) proučavanje kompleksa bioloških svojstava izolirane kulture i njegova identifikacija. Identifikacija čistih kultura (do vrste mikroorganizma) provodi se uzimajući u obzir morfološka, ​​tinktorska, kulturna, biokemijska, toksigena i antigena svojstva mikroorganizma. Većina studija uključuje određivanje antimikrobne osjetljivosti u izoliranom patogenu. Za epidemiološku procjenu uloge mikroorganizma, vrši se intraspecifična identifikacija određivanjem fagovara, biovara, otpornika itd..

Klasična mikrobiološka istraživanja imaju nekoliko nedostataka. Prije svega, ovo je prilično dugotrajan postupak. Minimalno razdoblje je 3-4 dana, ali može proći mnogo dana, pa i tjedana prije nego što se izolirani patogen točno identificira. Za neke patogene bakterije (Vibrio cholerae, difterijske bakterije) razvijene su ubrzane metode izolacije i identifikacije, ali one također omogućuju dobivanje odgovora najranije 36-48 sati.

Zadaća mikrobioloških istraživanja je izolirati mikroorganizme iz ispitivanog materijala i identificirati, odnosno odrediti njihove vrste.

Osnova mikrobioloških istraživanja je bakteriološka dijagnostička metoda čija je bit izolacija mikroorganizama u čistoj kulturi i njihova identifikacija.

Da bi se identificirali mikroorganizmi, proučavaju se sljedeća svojstva:

5. Patogeni: patogeni enzimi - lecitinaza, plazmakoagulaza itd.; toksigenost - sposobnost stvaranja egzotoksina (difterijski bacil, Staphylococcus aureus) (o tom pitanju detaljno je raspravljano u prethodnom semestru, vidi temu "Infekcija. Patogenost i virulencija

6. Antigeni (serološki) (o problemu se detaljno raspravljalo u temama odjeljka "Imunitet", vidi prethodni semestar)

7. Fagolizabilnost - sposobnost liziranja putem bakteriofaga (virusa bakterija): osjetljivost na terapijske fage (za liječenje zarazne bolesti) i osjetljivost na dijagnostičke fage (u novim, tipičnim); tipizacija faga - određivanje osjetljivosti na tipične fage, provodi se radi utvrđivanja izvora i putova širenja mikroorganizama u okolišu ili među kolektivima (o problemu se detaljno raspravljalo u temi "Bakteriofagija", vidi odgovarajuću temu)

8. Osjetljivost na baktericine i bakteriocinogeneza: provodi se radi utvrđivanja izvora i putova širenja mikroorganizama u okolišu ili među kolektivima (vidi temu "Genetika bakterija")

9. Osjetljivost na antimikrobne lijekove: antibiotici, kemoterapijski lijekovi i antiseptici (za liječenje zarazne bolesti, tema "Antibiotici"), dezinficijensi (za odabir režima dezinfekcije pogledajte temu "Asepsa, antiseptici. Dezinfekcija, sterilizacija").

Glavni nedostatak bakteriološke metode je trajanje studije - od 3 do 5 dana, au nekim slučajevima i više.

Rezultati mnogih dijagnostičkih studija za otkrivanje patogena u velikoj mjeri ovise o njihovoj vrsti, kao i o vremenu i načinu uzimanja patološkog materijala. Priroda materijala određuje se kliničkim značajkama bolesti: to bi trebali biti oni supstrati ili biološke tekućine u kojima je prisutnost patogena najvjerojatnije u ovoj fazi bolesti. Uspjeh bakteriološke metode uvelike ovisi o preliminarnoj fazi, uključujući prikupljanje ispitnog materijala i njegov transport, registraciju uputnice za bakteriološki laboratorij..

BIOLOŠKE METODE

Biološke metode usmjerene su na utvrđivanje prisutnosti toksina patogena u ispitivanom materijalu i otkrivanju patogena (posebno ako je početni sadržaj u testnom uzorku nizak ili kada se patogen ne može otkriti metodom inokulacije, na primjer, kod virusnih i rikecijskih bolesti).

Životinje su zaražene da bi izolirale čistu kulturu patogena u slučajevima kada se to ne može dobiti drugim metodama (na primjer, kada su ispitivani predmeti kontaminirani tuđom mikroflorom koja potiskuje rast patogena; s neznatnim sadržajem mikroorganizama ili njihovim prijelazom u oblike koji se mogu filtrirati).

Metode uključuju inficiranje osjetljivih laboratorijskih životinja (osjetljivih na sumnjivi patogen) ispitivanim materijalom, nakon čega slijedi izolacija čiste kulture patogena ili utvrđivanjem prisutnosti mikrobnog toksina i njegove prirode ili reproduciranje tipične kliničke slike..

Modeliranje eksperimentalnih infekcija kod osjetljivih životinja važan je alat za proučavanje patogeneze bolesti i prirode interakcija unutar sustava mikroorganizam - makroorganizam. Za biološke testove koriste se samo zdrave životinje određene tjelesne težine i dobi..

Infektivni materijal ubrizgava se oralno, u respiratorni trakt, intraperitonealno, intravenozno, intramuskularno, intradermalno i potkožno, u prednju očnu komoru, kroz kranijalni otvor, subokcipitalni (u veću cisternu mozga). Krv se uzima životinjama in vivo, eksudat iz peritoneuma, nakon smrti, krv, komadići različitih organa, likvor, eksudat iz različitih šupljina.

Mane: a) potreba za održavanjem vivarija; b) trajanje studije. Uz to, čak i kod laboratorijske infekcije, daleko je uvijek moguće izolirati patogena, što je posebno karakteristično za virusne infekcije..

SEROLOŠKA metoda sastoji se u određivanju titra specifičnih antitijela u serumu pacijenta. Za njegovu provedbu koriste se razne imunološke reakcije, kako jednostavne (aglutinacija i njezine sorte), tako i složene (RSK, ELISA, itd.).

Klasična serodijagnostika temelji se na:

1). Određivanje antitijela na patogen u dijagnostičkom titru;

2) Otkrivanje protutijela na uzročnika niza zaraznih bolesti u istraživanom krvnom serumu nije dovoljno za postavljanje dijagnoze, jer može odražavati prisutnost postinfektivnog ili postcijepnog imuniteta. Zbog toga se ispituju upareni serumi pacijenta, uzeti u prvim danima bolesti i nakon 7-10 dana (ponekad taj interval može biti i duži). U ovom se slučaju procjenjuje porast titra antitijela. Povećanje titra antitijela za 4 puta ili više ukazuje na zaraznu prirodu antitijela.

3) Kod egzotičnih zaraznih bolesti, kao i kod hepatitisa, HIV infekcije i nekih drugih bolesti, sama činjenica određivanja protutijela ukazuje na to da je pacijent zaražen i ima dijagnostičku vrijednost.

Serološka dijagnostička metoda koristi se od kraja prvog do početka drugog tjedna bolesti.

Da bi se otkrila protutijela, u testni serum dodaje se poznati antigen. Ti lijekovi, nazvani dijagnostikumi, suspenzija su ubijenih mikroorganizama (njihovi pojedinačni antigeni) ili eritrocita (čestice lateksa), na kojima se mikroorganizmi ili njihovi antigeni adsorbiraju.

PRAVILNA IMUNO-DIJAGNOSTIČKA METODA

Samoimuna metoda (ekspresno)

Svrha: potraga za antigenima mikroba u patološkom materijalu pomoću seroloških imunoloških reakcija (vidi reakcije u Dodatku 6. u odjeljku 4.).

Pozvane su serološke reakcije imunosti između antigena (AG) i antitijela (AT). Odrednica hipertenzije veže se za aktivno središte AT. Veza AG i AT provodi se vodikovim i hidrofobnim vezama, interakcijom iona, Coulombove i van der Waltzove sile. Snagu veze između AG i AT pružaju ne samo sile vezanja, već i optimalna prilagodba aktivnog mjesta AT odrednici AG. Serološke reakcije odvijaju se u dvije faze. Prvi - specifični nevidljivi - je u interakciji AG s AT. Druga faza - vidljiva - očituje se ovisno o vrsti reakcije, koja je određena svojstvima AG, AT i ostalih sastojaka reakcije. Postoji nekoliko vrsta reakcija: aglutinacija, taloženje (imunološka difuzija), liza, neutralizacija itd..

Reakcija aglutinacije

U reakciji aglutinacije (RA) antigen sudjeluje u obliku korpuskularne čestice. To mogu biti suspenzije mikroorganizama, tjelesnih stanica, na primjer, eritrocita.

Kad se pomiješaju s određenim antiserumom, vizualno prepoznatljive pahuljice - imunološki kompleksi se slijepe i talože.

Reakcija aglutinacije može se postaviti kvalitativno - na staklu i kvantitativno - u epruvete u kojima se pripremaju razrjeđenja u serumu.

Neizravna (pasivna) reakcija hemaglutinacije (RNGA) svojevrsna je modifikacija RA.

Njegova je bit u činjenici da se molekule antigena adsorbiraju na površini eritrocita (nakon obrade eritrocita taninom ili formalinom). Takvi "napunjeni" AG eritrocitima stječu sposobnost aglutinacije imunološkim serumom specifičnim za ovaj AG.

Stvaranje kompleksa AG-AT podrazumijeva i lijepljenje eritrocita (hemaglutinat se stvara na dnu jažice ili epruvete u obliku "obrnutog kišobrana"), što je lako uzeti u obzir. Dakle, eritrociti nisu izravno uključeni u stvaranje kompleksa AG-AT, već služe kao njegovi pokazatelji.

RNGA je osjetljiviji od RA.

Coombsova reakcija

Ovo je test za otkrivanje nepotpunih antitijela koja ne mogu sama aglutinirati antigene, ali se na njih mogu povezati. Reakcija se izvodi u fazama: eritrocitni dijagnostik dodaje se u serum krvi ispitanika - poznati antigeni adsorbirani na eritrocitima. Nakon inkubacije, eritrociti se isperu i doda se zečji antihumani globulin AT. Kao rezultat toga, antiglobulin serum lijepi eritrocite kroz AG-AT komplekse nastale na njima.

Postoje dvije vrste Coombsove reakcije: izravna i neizravna:

• Izravna metoda: otkrivanje protutijela protiv rezus-a adsorbiranih na eritrocitima novorođenčeta.

Novorođenčetu se uzima krv, peru se eritrociti, dodaju im se

antiglobulinska antitijela: ostvaruje se fenomen "rešetke" - dolazi do aglutinacije eritrocita vidljivih okom

• Neizravna metoda: otkrivanje anti-rezus antitijela u majčinom serumu.

/// 1. Standardni Rh-pozitivni eritrociti dodaju se u epruvetu s majčinim serumom. Protu-rezus antitijela majčinog seruma adsorbiraju se na eritrocitima.

2. Uvesti antiglobulin serum (antiglobulin antitijela) u epruvetu: ostvaren je fenomen „rešetke“ - javlja se aglutinacija eritrocita vidljivih na oku

Reakcija oborina

Fino raspršeni (topljivi antigen) sudjeluje u reakciji taloženja (RP). U dodiru s antitijelima - precipitinima nastaje talog.

Reakcija taloženja može se provesti u tekućem mediju (u uskim cijevima) i u gelu (u Petrijevim zdjelicama). Prilikom postavljanja RP u uske epruvete, tekućina koja sadrži jedan od reagensa, na primjer, prozirni ekstrakt iz mikrobnih stanica (0,2 ml), sloji se na prozirni taložni serum (0,2 ml). U pozitivnim slučajevima, na granici između tekućina nakon 1-5 minuta nastaje sivo-bijeli prsten. RP, poput RA, ulazi u elektrolit, ali ima veću osjetljivost.

Sheme reakcija oborina u epruveti (A) i agaru (B).

Jedna od vrsta RP u gelu je reakcija za određivanje toksikogenosti bacila difterije. Za to se traka sterilnog filtarskog papira namočenog u antitoksični serum protiv difterije stavi u Petrijevu zdjelicu na hranjivi medij. Zatim se posuda cijepi s ispitivanim kulturama u obliku flastera na udaljenosti od 0,6-0,8 cm od ruba papira. Posuđe se inkubira na 37 ° C tijekom 24 sata. U prisutnosti toksigene kulture na mjestu interakcije toksina s antitoksinom, oborinske linije nastaju u obliku luka (brkovi, poluprstenovi).

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Ravna linija (Koonsova metoda). Mikroorganizmi tretirani antitijelima obilježenim fluorokromima mogu svijetliti u fluorescentnom mikroskopu.

Neizravno. U prvoj fazi mikroorganizmi stupaju u interakciju sa specifičnim serumom. Nadalje, na formirani imunološki kompleks utječe serum antiglobulina obilježen fluorokromom. Imunološki kompleks s ovim konjugatom svijetli u fluorescentnom mikroskopu.

Reakcija fiksacije komplementa (CBC)

Ovo je reakcija lize antigena (npr. Citoliza, bakterioliza) antitijelima uz sudjelovanje komplementa. Ako je antigen bakterijska stanica ili virus, tada liza nije popraćena vidljivim manifestacijama. Stoga se za otkrivanje prisutnosti komplementa AG + AT + komplementa u eksperimentalnom sustavu, gdje je jedna od komponenata (AG ili AT) nepoznata, koristi indikatorski sustav AG + AT, gdje su obje komponente poznate i liza antigena se dobro očituje, budući da se eritrociti uzimaju kao AG... Reakcija se temelji na sposobnosti komplementa - složenog sustava proteina normalnog seruma kralježnjaka - da se fiksira na AG-AT kompleks i naknadnoj lizi antigena. U RSC je uključeno pet komponenata: AG-AT eksperimentalnog sustava, u kojem je jedan od reagensa nepoznat, sustav komplementa i indikatora.

Pokazatelj - hemolitički sustav sastoji se od suspenzije eritrocita ovna i hemolitičkog seruma kunića dobivenih imunizacijom ovnovih eritrocita. Ako AG i AT u eksperimentalnom sustavu odgovaraju jedni drugima, tada je rezultat ove interakcije vezivanje komplementa. Sustav indikatora otkriva slobodni, nevezani komplement. Ako komplement ostane slobodan, tada će se vezati za kompleks eritrocita - hemolitički serum i lizirat će eritrocite. Dakle, prisutnost hemolize znači negativan rezultat CSC-a, a odsutnost hemolize pozitivan rezultat..

Metoda imunološkog ispitivanja

Visoko osjetljiva metoda za otkrivanje AG ili AT na temelju reakcije AG-AT pomoću enzima obilježenih AG ili AT.

Shematski dijagram enzimskog imunoanaliza za otkrivanje AT je kako slijedi. Poznati AH (virus, protein) - diagnostikum - fiksiran je na čvrstoj fazi. Dodaje mu se serum ispitanika s nepoznatim AT. Nakon inkubacije i pranja, antigen specifični AT ostaje na antigenu, ako postoji, u serumu ispitanika. Da bi se otkrio kompleks AG - AT, dodaje mu se enzimski obilježeni zečji antiglobulinski serum (AGS-F). Da bi se dobio ovaj serum, zec se imunizira ljudskim globulinima. Serum dobiven od kunića obilježen je enzimom, na primjer peroksidazom hrena. Ako testni serum sadrži AT do AG (diagnostikum), tada će služiti kao antigen za antiglobulinski serum. Nakon drugog pranja, formirani kompleks AG + AT + AGS-F može se otkriti dodavanjem supstrata enzimu i indikatora za proizvode razgradnje supstrata. Promjena boje indikatora ukazuje na prisutnost željenog AT u serumu ispitanika.

METODA ALERGIJSKE DIJAGNOSTIKE.

S mnogim zaraznim bolestima razvija se stanje preosjetljivosti, uz ponavljano uvođenje patogena ili njegovih metaboličkih produkata. Ovo stanje, nazvano zaraznom alergijom, karakteristično je za tuberkulozu, tularemiju, brucelozu, žlijezde, sifilis, antraks, toksoplazmozu, zaušnjake, herpes simplex i brojne druge infekcije..

Za identificiranje zarazne alergije koriste se alergijski dijagnostički testovi, za koje se strogo intradermalno ubrizgava odgovarajući alergen.Prisutnost hiperemije i infiltracije ukazuje na pozitivan rezultat reakcije, tj. Na prisutnost zarazne alergije..

Alergijska dijagnostička metoda temelji se na alergijskoj reakciji - odgođenoj reakciji preosjetljivosti (HRT).

Stvaranje reakcije HRT-a ne temelji se na humoralnom, već na staničnom imunološkom odgovoru tijela na prvi (senzibilizirajući) kontakt s određenim antigenom. Senzibilizacija je povezana s pretežnom proliferacijom T-limfocita koji nose receptore specifične za određeni alergen. Nakon toga u tijelu ostaje dugo vremena multiplicirajući klon senzibiliziranih T-limfocita, koji kada ponovno uđe u tijelo reagira sa određenim alergenom..

Otkrivanje staničnog imunološkog odgovora - preosjetljivost odgođenog tipa (HRT), shema

* Intradermalno davanje Ag bakterija

* Nakon 48 - 72 sata pojavljuje se upala

* Izmjerite količinu crvenila i papula

• Ag Tx oslobađa limfokine, aktivaciju TCTL-a, aktivaciju fagocita, upalu

DTH reakcije uključuju: T-pomagače (potiču stvaranje T-efektora putem IL-2) → T-efektori (proizvode limfokine - kemoattraktante i privlače makrofage u žarište upale) → makrofagi (proizvode monokine posrednike) → mononuklearni infiltrat na mjestu ubrizgavanja alergena → vrijednost infiltracija ovisi o stupnju senzibilizacije tijela i doseže maksimum nakon 24-48 sati

Alergijski dijagnostički testovi omogućuju dijagnozu tuberkuloze (Mantouxov test), bruceloze (Burneov test), tularemije (test s tularinom), antraksa (test s antraksinom), šankra (Ducreyev test), gube (Mitsuda test), a potonji čak i razlikuju tuberkuloidni (lepromin-pozitivan) oblik iz lepromatoznog (lepromin-negativan).

Pozitivan alergijski test kože ukazuje na to da se uvođenje alergena tijekom testa ponavlja, odnosno da je pojedinac u prošlosti imao kontakt s mikrobnim sredstvom. Ovdje utječe glavni nedostatak dijagnostičke vrijednosti kožno-alergijskih testova, budući da oni mogu biti pozitivni ne samo kod zaraženih, već i kod cijepljenih protiv ovih bolesti, kao i kod osoba koje su prije mnogo godina imale bolesti, uključujući i nosače, tj. pozitivan test u zdravih osoba ukazuje samo na kontakt s mikrobnim antigenom.

Pri određivanju prirode bolesti istinsku dijagnostičku vrijednost ima samo prijelaz s negativnog kožnog testa na pozitivni, koji se uočava tijekom bolesti. Uz to, okretanje reakcije, odnosno povećanje ozbiljnosti njenog očitovanja ponovljenim ispitivanjem, također služi kao osnova za detaljnije ispitivanje infekcije ovim patogenom..

Pri uzimanju nekih lijekova kortikosteroidnih hormona, imunosupresiva, kao i kod nekih bolesti (sarkoidoza, Hodgkinova bolest i određeni tumori), teško je uzeti u obzir rezultate alergijskih testova, jer u tim slučajevima postoji takozvana anergija, tj. Značajno smanjenje ukupne reaktivnosti kože.

Štoviše, kada se osip pojavi kod djece, kada dijete pati od jedne od takvih bolesti kao što su ospice, vodene kozice, može se pojaviti i anergija, a tijekom tog razdoblja, kada se provodi Mantouxov test, tuberkulin pozitivno dijete može privremeno postati negativno na tuberkulin, tj. Lažno negativno proizlaziti.